疏水作用色譜是70年代興起的一種新型的純化分離模式,目前已成為分離純化生物大分子的有效手段之一[1,2]｡疏水作用色譜填料對色譜分離效果至關重要｡球狀交聯聚乙烯醇(PVA)作為疏水作用色譜固定相具有一定的機械強度,能承受較高的柱壓,有良好的化學穩定性,不溶于水及有機溶劑,不受微生物影響,pH值使用范圍廣且與生物大分子有很好的相容性｡因此,以聚乙烯醇為基質的固定相是一種新型高效的疏水作用色譜固定相,可應用于高效液相色譜,分離､純化生物活性蛋白質等大分子物質,是今后疏水色譜填料的一個發展方向｡
球狀聚乙烯醇顆粒的制備是球狀聚乙烯醇疏水作用色譜固定相制備的關鍵之一｡筆者對PVA水溶液含量､甲醛用量､表面活性劑配伍和用量､油水體積比､反應溫度及攪拌速度等工藝影響因素進行了研究和探索,以聚乙烯醇為原料采用懸浮聚合法成功地制備了具有一定機械強度､粒度和孔徑的球狀交聯聚乙烯醇顆粒｡
1 實驗
1.1 主要儀器和試劑
儀器:數字溫度控制儀(上海醫用儀表廠),增力電動攪拌機(上海標本模型廠),標準磨口玻璃儀器｡試劑:PVA19-99(工業品,廣西維尼綸集團公司),其余甲醛､span-80､碘､硫酸､亞硫酸氫鈉和油酸鈉均為AR級化學試劑｡
1.2 球狀交聯聚乙烯醇的制備
將溶解好的聚乙烯醇､一定量的表面活性劑和變壓器油注入500ml的三口燒瓶中,調節水浴溫度為88~
1.3 縮醛化度的測定[3]
將干燥球粒在硫酸溶液中加熱蒸餾,用NaH-SO3溶液吸收甲醛,以淀粉溶液作指示劑,碘酒溶液進行滴定｡
2結果與討論
2.1 水溶液中聚乙烯醇含量與成球的關系
水溶液中聚乙烯醇含量對成球有著重要的影響｡當PVA含量較低時,水分含量較大,隨著水分的大量蒸發,易形成結構松散､機械強度低的球粒;PVA含量較高時,粘度大,分散困難,容易結塊,固定其它優惠條件(下同)對水溶液中PVA的含量與成球質量的關系進行了觀察,有關實驗結果列于表1｡結果表明水溶液PVA含量以15%為好｡
2.2 表面活性劑與成球的關系
在反應體系中加入適當的表面活性劑,可以調節PVA漿料和油相間界面張力的大小｡將非離子型表面活性劑與離子型表面活性劑聯合使用時,兩者交替地被吸附在分散液滴表面上,形成了堅實的界面膜,從而提高了乳化液的穩定性｡經過反復實驗,采用油酸鈉和span-80聯合使用效果最好(見表2)｡
2.3 甲醛用量與成球的關系
甲醛的用量直接影響著縮醛反應的進行｡當縮醛化度為30%時,顆粒有較好的機械強度和硬度,也有利于后面功能化反應的進行｡在優惠條件下進行懸浮聚合,縮醛化度與甲醛用量的關系如附圖｡附圖 縮醛化度與甲醛用量的關系
2.4 油水體積比､攪拌速度與成球的關系
油水體積比和攪拌速度太小,聚乙烯醇漿料難以被完全分散,聚乙烯醇液滴容易重新粘合在一起｡隨著油水比和轉速增大,液滴之間碰撞的幾率較少,可以獲得比較均勻的球狀顆粒｡實驗所得顆粒粒徑的分布與油水體系比及攪拌速度的關系如表3所示｡
2.5 溫度的選擇
縮醛化反應溫度升高，有利于加快反應速度，但溫度太高，體系粘度下降，聚乙烯醇液滴碰撞幾率增加，有絮凝膠產生。當反應為
3 結論
本實驗對球狀交聯聚乙烯醇制備的工藝條件進行了探索｡將50ml15%的聚乙烯醇水溶液分散在300ml的變壓器油中,加入
參考文獻:
[1] W Noppe, I Hansses, M De Cuyper. Simple two –step procedure for preparation of highly active pure equine milk lysozy me[J]. J Chromatogr A,1996,719:327~331.
[2] 白泉,衛引茂,耿信篤.胍變及脲變α 淀粉酶的研究[J] 色譜,1997,15(4):284~287.
[3] 鄒洲平.聚乙烯醇縮甲醛膠中游離甲醛測定方法探討[J] 新疆化工,1999,1:49~50.
[4] 朱和輝.苯基聚乙烯醇疏水色譜填料的制備及其在大分子分離中的應用[D] 華南理工大學碩士論文,1999:21.
